Allergen ELISA Kit II: Kasein

Extraktionsverfahren

Schnelles Extraktionsverfahren

• Die Proben zermahlen/zerkleinern
• 1,0 g Probe in ein Probenröhrchen einwiegen, 19 mL Probenextraktionslösung hinzufügen.
• Das verschlossene Probenröhrchen 10 Minuten lang in kochendem Wasser inkubieren.
• Das Probenröhrchen abkühlen lassen und 30 Sekunden lang vortexen.
• Den pH-Wert auf 6,0-8,0 einstellen.
• Zentrifugieren und den Überstand filtrieren, falls erforderlich.
• Probenextrakt 20-fach mit Verdünnungslösung I verdünnen.

Über-Nacht-Extraktionsmethode

• Die Proben zermahlen / zerkleinern
• 1,0 g Probe in ein Probenröhrchen einwiegen, 19 mL Probenextraktionslösung hinzufügen.
• Das Probenröhrchen waagerecht auf einem Schüttler befestigen und über Nacht bei Raumtemperatur schütteln.
• Den pH-Wert auf 6,0-8,0 einstellen.
• Zentrifugieren und filtrieren Sie den Überstand, falls erforderlich.
• Probenextrakt 20-fach mit Verdünnungsmittel I verdünnen.

ELISA-Verfahren

• 100 μL Standardlösung und Probenlösung in ein Well der Platte pipettieren.
• Die Platte 1 Stunde lang bei 20-30°C (68-86°F) inkubieren.
• Die Wells 6-mal mit Waschlösung waschen.
• 100 μL enzymkonjugierten Antikörper (F) auftragen.
• Die Platte 30 Minuten lang bei 20-30 °C inkubieren (68-86 °F).
• Die Wells 6-mal mit Waschlösung waschen.
• 100 μL Enzymsubstrat (G) zugeben.
• Die Reaktion 20 Minuten lang bei 20-30°C (68-86°F) im Dunkeln inkubieren.
• Die Enzymreaktion durch Zugabe von 100 μl Stopplösung (H) stoppen.
• Die Absorption bei 450 nm messen.
• Die Konzentration des nachweisbaren Proteins anhand der Standardkurve berechnen.