Estos kits ELISA son inmunoensayos enzimáticos tipo sándwich para la determinación cuantitativa de proteínas individuales de ingredientes alergénicos en alimentos procesados o no procesados. Estos kits están diseñados para ser utilizados por personal de control de calidad u otros profesionales capacitados, para la vigilancia de alérgenos en la producción o para controles de liberación de productos.
Las proteínas en las muestras se extraen, se centrifugan y se filtran antes del ELISA tipo sándwich. El antígeno se une a los pocillos recubiertos con anticuerpos policlonales del módulo de microplaca, lo que da como resultado un complejo antígeno-anticuerpo. Posteriormente, el anticuerpo conjugado con enzima se une al complejo antígeno-anticuerpo ya unido, formando un sándwich anticuerpo-antígeno-anticuerpo.
La adición de sustrato enzimático da como resultado el desarrollo de color, cuya intensidad se puede determinar por la absorbancia a 450 nm. La intensidad del color desarrollado es directamente proporcional a la concentración de proteína de los ingredientes alergénicos en el alimento.
1 x 96 pocillos de microplacas (12 tiras de 8 pocillos)
Tampones y enzimas asociados
Tiempo de medición:
Tiempo de preparación de la muestra: Aprox. 10 min
Tiempo de extracción de la muestra: Aprox. 30 min, o durante la noche
Análisis ELISA: Aprox. 2 h
Sensibilidad del ensayo: 0,16 ppm (μg proteína/g alimento)
Rango de concentración detectable: 0,39 – 25 ppb de proteína detectable
Almacenamiento: A 2-8 °C (35-46 °F), NO CONGELAR
Temperatura de trabajo: 20-30 °C (todas las soluciones deben estar equilibradas)
Procedimiento de extracción
Método de extracción de corto tiempo
Molienda/pica las muestras
Pesa 1,0 g de muestra en un tubo, añade 19 mL de solución de extracción de muestra.
Incuba el tubo tapado en agua hirviendo durante 10 minutos.
Enfría el tubo y agítalo durante 30 segundos.
Ajusta el pH a 6,0-8,0.
Centrifuga y filtra el sobrenadante si es necesario.
Diluye el extracto de muestra 20 veces con diluyente I.
Método de extracción durante la noche
Molienda/pica las muestras
Pesa 1,0 g de muestra en un tubo, añade 19 mL de solución de extracción de muestra.
Fija el tubo en un agitador horizontalmente y oscila a temperatura ambiente durante la noche.
Ajusta el pH a 6,0-8,0.
Centrifuga y filtra el sobrenadante si es necesario.
Diluye el extracto de muestra 20 veces con Diluyente I.
Procedimiento ELISA
Pipetee 100 μL de Solución de trabajo estándar y de muestra de trabajo en un pocillo de la microplaca.
Incube la microplaca durante 1 hora a 20-30 °C (68-86 °F).
Lave los pocillos 6 veces con Solución de lavado.
Dispense 100 μL de Anticuerpo conjugado con enzima (F).
Incube la microplaca durante 30 min a 20-30 °C (68-86 °F).
Lave los pocillos 6 veces.
Dispense 100 μL de Sustrato enzimático (G).
Incube la reacción durante 20 min a 20-30 °C (68-86 °F) en la oscuridad.
Detenga la reacción enzimática agregando 100 μL de Solución de detención (H).
Medir Absorbancia a 450 nm.
Calcule la concentración de proteína detectable utilizando la curva estándar.