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Compact Dry LM    Produto

é uma placa cromogénica pronta a utilizar para a detecção deListeria monocytogenes

download New Compact Dry LM for detection of L.monocygotones .pdf

download CompactDry- LM-Detection-IllustrationManual.pdf


Utilização prevista

Este produto destina-se a ser utilizado por microbiologistas para a deteção e contagem de Listeria monocytogenes em alimentos e amostras conexas.

Procedimento Operacional para Deteção

Preparação do espécime

1) Deteção em alimentos sólidos, água ou alimentos líquidos
Adicionar 9 vezes em volume de caldo demi-Fraser à amostra e homogeneizar num homogeneizador. Incubar a 30 + 1? durante 25 + 1 horas para a cultura de enriquecimento.

2) Deteção em amostra limpa
Adicionar 9 vezes em volume de caldo demi-Fraser à solução de limpeza. Incubar a 30 + 1? durante 25 + 1 horas para a cultura de enriquecimento.

Instruções

1) Abra a bolsa de alumínio e retire o conjunto de 4 placas.

2) Separe a quantidade que precisa de um conjunto de quatro fletindo para cima e para baixo enquanto exerce pressão sobre a tampa.

3) Tire a tampa da placa e deposite 1 ml de diluente esterilizado (p. ex. soro fisiológico) no meio de uma folha seca para transformar toda a folha num gel.

4) Deposite 0,1 mL de cultura de enriquecimento no meio da folha. Raspe a folha com o inóculo de cima para baixo suavemente com uma hansa e espalhe-o pela totalidade da folha a fim de obter colónias individuais.

5) Inverta a placa tapada depois de repor a tampa novamente e depois incube durante 24 + 2 horas a 37 + 1 ?. Se forem evidentes colónias de presumível L. monocytogenes, a incubação pode ser parada nesta fase. Se não forem evidentes, continuar a incubação por mais 24 + 2 horas a 37 + 1 ?.

Procedimento Operacional para Contagem

Preparação do espécime

1) Contagem de micro-organismos viáveis em alimentos sólidos
Adicionar 9 vezes em volume de Água Peptonada Tamponada (BPW ISO) à amostra e homogeneizar com o homogeneizador. Pipetar 1mL de espécime homogeneizado (para ser mais diluído se necessário) no meio de uma folha seca de LM Seca Compacta.

2) Contagem de micro-organismos viáveis em água ou alimentos líquidos
Pipetar 1mL de amostra de líquido (para diluir se necessário) no meio de uma folha seca de LM Seca Compacta.

3) Contagem de micro-organismos viáveis em amostra limpa
Inocular 1mL de solução de limpeza (para diluir se necessário) no meio de uma folha seca de LM Seca Compacta. Recomenda-se a utilização do cotonete Compact Dy

Instruções

1) Abra a bolsa de alumínio e retire o conjunto de 4 placas.

2) Separe a quantidade que precisa de um conjunto de quatro fletindo para cima e para baixo enquanto exerce pressão sobre a tampa. Utilize um conjunto de quatro placas sendo interligadas quando é inoculada uma série de amostras diluídas.

3) Retire a tampa da placa e deposite 1 ml do espécime no centro de uma folha seca. O espécime difunde-se automaticamente e uniformemente por toda a folha (um meio com 20 cm2 de tamanho) para o transformar em gel.

4) Inverta a placa tapada depois de repor a tampa novamente e depois incube durante 24 + 2 horas a 37 + 1 ?. Se forem evidentes colónias de presumível L. monocytogenes, a incubação pode ser parada nesta fase. Se não forem evidentes, continuar a incubação por mais 24 + 2 horas a 37 + 1 ?.

Precauções durante a utilização

Precaução para a Deteção e Contagem

1) Durante a incubação, não toque na superfície do meio e/ou na ponta do conta-goras e tenha o cuidado de evitar qualquer contaminação por micro-organismos que caiam.

2) Durante a incubação mantenha a tampa do Compact Dry apertada para evitar qualquer possível desidratação.

3) Recomenda-se o uso de um saco de Stomacher com filtro para eliminar o risco de transferência de pequenos pedaços de alimentos para a superfície do meio.
Precauções para Deteção

4) Durante a raspagem, não aplique força na alça e deslize-a suavemente sobre a superfície da folha. É adequada para a raspagem uma alça com um diâmetro grande e uma superfície macia.

Precauções para Enumeração

5) Os espécimes devem ser diluídos com uma solução tampão até um nível de concentração inferior a 300 cfu/placa.

6) Se forem inoculadas bactérias de mais de 104 cfu numa placa, não se vão formar colónias independentes e todo o meio muda de cor.

7) Se a natureza do espécime não afetar o resultado, o espécime deve ser inoculado apenas depois de eliminada a causa por meio de, por exemplo, diluição e outros. Por exemplo, espécimes tais como alta viscosidade, cor profunda e pH demasiado alto ou demasiado baixo.

Interpretação na Deteção

1) Interpretar as colónias vermelhas, com ou sem cercaduras azuis, como presumível positivo para Listeria monocytogenes.

2) Se um volume de L. monocytogenes for demasiado, não serão formadas colónias individuais e toda a folha ou parte raspada de uma folha apresenta a cor vermelha. Interpretar o resultado como presumível positivo também neste caso.
Interpretação na Contagem

3) Contar as colónias vermelhas com ou sem cercadura azul como presumível L. monocytigenes.

Interpretação na Deteção e Enumeração

4) Se forem observadas colónias presumíveis de L. monocytogenes , realize testes de confirmação segundo as normas ISO11290-1:2017, ISO11290-2:2017 ou outros métodos.

Precaução para interpretação

1) A Listeria ivanovii forma também colónias vermelhas com ou sem cercaduras azuis como L. monocytogenes.

2) A Listeria spp. com exceção da L. monocytogenes e da L. ivanovii formam colónias azul/verde. Outras bactérias além da Listeria spp. são inibidas por agentes seletivos no meio ou não formam colónias de cor mesmo que se desenvolvam. Raramente, alguns Bacillus spp. podem formar colónias relativamente grandes, achatadas e cor-de-laranja.

3) o L. monocytogenes pode formar colónias cor-de-laranja, castanho-avermelhado ou roxo-avermelhado para além das colónias vermelhas.

4) Um papel branco colocado sob a placa pode tornar mais fácil observar as colónias.

5) O tamanho de cada placa LM é 20 cm2 e a parte de trás do contentor possui uma grelha gravada de 1 cm x 1cm para facilitar a contagem das colónias. Quando é difícil contar as colónias devido ao grande número de colónias que cresceram no meio, pode-se obter o número total de bactérias através da multiplicação de 20 por um número médio de colónias por grelha (1cm x 1cm) calculado a partir de grelhas representativas.






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