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Compact Dry LM    Produit

Compact Dry LM est une plaque chromogène prête à l'utilisation pour détecter Listeria monocytogenes

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Utilisation
Ce produit est destiné aux microbiologistes souhaitant réaliser la détection et l`énumération de Listeria monocytogenes dans les aliments et d`autres échantillons.

Procédure de détection

Préparation de l`échantillon

1) Détection dans les aliments solides, l`eau et les aliments liquides
Ajoutez 9 volumes de dilution en Fraser ½ à l`échantillon et homogénéisez par homogénéisateur. Incubez à 30 + 1°C pendant 25 + 1 heures pour la culture d`enrichissement.

2 )Détection dans l`échantillon prélevé par frottis
Ajoutez 9 volumes de dilution en Fraser ½ à l`échantillon prélevé par frottis. Incubez à 30 + 1°C pendant 25 + 1 heures pour la culture d`enrichissement.

Instructions

1) Ouvrez le sachet en aluminium et sortez un jeu de 4 plaques.

2) Détachez la quantité de plaques voulues en pliant vers le haut puis vers le bas tout en appuyant sur le couvercle.

3) Retirez le couvercle de la plaque et versez 1 ml d`un diluant stérilisé (par exemple solution saline) au centre de la feuille déshydratée afin de la gélifier.

4) Versez 0,1 mL de l`enrichissement au centre de la feuille. Versez avec précaution l`inoculum sur la feuille de haut en bas à l`aide d?une anse d`inoculation, et étalez-le sur toute la feuille pour créer des colonies individuelles.

5) Refermez le couvercle de la plaque et retournez-la dans l?autre sens, puis incubez pendant 24 + 2 heures à 37 + 1°C. Si des colonies de L. monocytogenes présumées sont mises en évidence, vous pouv ez arrêter l?incubation à ce stade. Si elles ne sont pas mises en évidence, incubez pendant une période supplémentaire de 24 + 2 heures à 37 + 1°C

Procédure d`énumération

Préparation de l`échantillon

1) Nombre viable dans les produits alimentaires solides
Ajoutez 9 volumes d`eau peptonée tamponnée (BPW ISO) à l`échantillon et homogénéisez par homogénéisateur. A l`aide d`une pipette, versez 1mL de l´échantillon homogénéisé (éventuellement dilué si nécessaire) au centre d`une feuille déshydratée de Compact Dry LM.

2) Nombre viable dans de l`eau ou des aliments liquides
A l`aide d`une pipette, versez 1mL d`échantillon liquide (éventuellement dilué si nécessaire) au centre d`une feuille déshydratée de Compact Dry LM.

3) Nombre viable dans l`échantillon prélevé par frottis
Inoculez 1mL de solution prélevée par frottis (éventuellement diluée si nécessaire) au centre d`une feuille déshydratée de Compact Dry LM. Il est recommandé d`utiliser l`écouvillon Compact Dry.

Instructions

1) Ouvrez le sachet en aluminium et sortez un jeu de 4 plaques.

2) Détachez la quantité de plaques voulues en pliant vers le haut puis vers le bas tout en appuyant sur le couvercle. Utilisez un jeu de quatre plaques rattachées les unes aux autres lorsque vous inoculez une série d`échantillons dilués.

3) Retirez le couvercle de la plaque et versez 1 ml d`échantillon au centre de la feuille déshydratée. L`échantillon se diffuse automatiquement et uniformément sur toute la feuille (taille moyenne 20 cm2) et la gélifie.

4) Refermez le couvercle de la plaque et retournez-la dans l`nautre sens, puis incubez pendant 24 + 2 heures à 37 + °C. Si des colonies de L. monocytogenes présumées sont mises en évidence, vous pouvez arrêter l`nincubation à ce stade. Si elles ne sont pas mises en évidence, incubez pendant une période supplémentaire de 24 + 2 heures à 37 + 1°C.

Précautions d`utilisation

Précautions concernant la détection et l`énumération

1) Pendant l`inoculation, ne touchez pas la surface du milieu de culture et/ou à l`nextrémité de la pipette, et veillez à éviter toute contamination due à une introduction de microorganismes.

2) Pendant l`nincubation, le couvercle de la plaque Compact Dry doit rester parfaitement fermé pour éviter tout risque de déshydratation.

3) Il est conseillé d`nutiliser un sac Stomacher avec un filtre pour éliminer le risque de chute de petits fragments d`naliments sur la surface du milieu de culture.
Précautions concernant la détection

4) Pendant l`étalement, n`nappuyez pas trop fortement sur l`anse d`inoculation et faites-la glisser doucement à la surface de la feuille. Utilisez une anse d`ninoculation de grand diamètre et une surface lisse.

Précautions concernant l`énumération

5 )L`échantillon doit être dilué avec la solution tampon de façon à obtenir un niveau de concentration inférieur à 300 UFC/plaque.

6) Si plus de 104 UFC de bactéries sont inoculées sur une plaque, il ne se forme pas de colonies indépendantes et tout le milieu est envahi.

7) Si la nature de l`échantillon affecte le résultat, l`échantillon doit être inoculé uniquement après élimination de la cause, par exemple par dilution. Exemples : échantillons à haute viscosité, couleur foncée, et pH trop élevé ou trop bas.


Interprétation de la détection

1) Vous pouvez interpréter les colonies rouges avec ou sans contours bleus comme un résultat positif présumé indiquant la présence de Listeria monocytogenes.

2) Si un volume de L. monocytogenes est trop important, aucune colonie individuelle n`est formée et tout ou partie de la feuille prend une couleur rouge. Dans ce cas également, vous pouvez interpréter le résultat comme un positif présumé.
Interprétation de l`énumération

3) Comptez les colonies rouges avec ou sans contours bleus comme un résultat positif présumé indiquant la présence de L. monocytogenes.
Interprétation de la détection et de l`énumération

4) Si des colonies présumées de L. monocytogenes sont observées, exécutez des tests de confirmation selon les méthodes ISO11290-1:2017, ISO11290-2:2017 ou d`autres méthodes.

Précautions concernant l`interprétation

1) Listeria ivanovii forme également des colonies rouges avec ou sans contours bleus, comme L. monocytogenes.

2) Listeria spp., à l`exception de L. monocytogenes et de L. ivanovii, forme des colonies bleues/vertes. Les bactéries autres que Listeria spp. sont inhibées par certains agents du milieu de culture, ou ne forment pas de colonies colorées même si elles se développent. Dans certains cas rares, certains Bacillus spp. peuvent former des colonies de couleur orange, plates et de relativement grande taille.

3) L. monocytogenes peut former des colonies de couleur orange, brun rougeâtre ou violet rougeâtre, en plus de colonies rouges.

4) Une feuille de papier blanc placée sous la plaque facilite l`observation des colonies.

5) La plaque LM a une taille de 20 cm2 et l`arrière comporte une grille en relief de 1 cm x 1 cm qui facilite le dénombrement des colonies. S`il est difficile de dénombrer les colonies en raison de la présence d?un nombre élevé de colonies dans le milieu de culture, vous pouvez obtenir la numération bactérienne en multipliant le nombre 20 par un nombre moyen de colonies par grille (1cm x 1cm) calculé à partir de grilles représentatives.






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